Q
¿Cómo preservar los péptidos sintetizados?
Los péptidos necesitan generalmente ser almacenados lejos de la luz para el almacenamiento de larga duración, y se deben almacenar en -20 grados, y se pueden almacenar en 4 grados para a corto plazo. Puede ser enviado en la temperatura ambiente por cortos períodos de tiempo. Los péptidos son estables en -20°C, especialmente cuando están liofilizados y almacenados en un desecador. Los péptidos liofilizados se pueden guardar en la temperatura ambiente antes de exponerlos para ventilar. Esto reducirá el efecto de la humedad, y cuando la liofilización no es posible, el mejor acercamiento es almacenar pequeñas muestras de trabajo. Para los péptidos que contienen Cys, encontrado o TrP, almacenador intermediario de la desoxidación es esencial para su disolución, porque este péptido se puede oxidar fácilmente por el aire, y gas del nitrógeno o de hidrógeno que atraviesa lentamente el péptido antes de sellar la botella también reducirá la oxidación. Los péptidos que contienen la ginebra o Asn son también degradación propensa, y todos estos péptidos tienen un curso de la vida limitado comparado a ésos sin estos simplicidad problemática.
Q
¿Si mi péptido es el 95% puro, cuál es el otro 5%?
La pureza del péptido es determinada generalmente por la CLAR usando una pendiente del acetonitrilo del 1% por minuto. Durante el proceso de la síntesis, la eficacia de la interconexión entre los aminoácidos no puede alcanzar siempre 100%, así produciendo una serie de impurezas con aminoácidos que falta. La mayor parte de estas impurezas ácido-suprimidas amino fueron quitadas durante la purificación, pero algún tenía perfiles cromatográficos que se asemejaron de cerca al péptido de la blanco. Los péptidos del contaminante con estas eliminaciones del aminoácido que permanecen en la muestra del péptido componen el restante el poco por ciento.
Q
¿Cómo péptidos se purifican?
La purificación del péptido utiliza generalmente una columna inversa (tal como C8, C18, etc.), 214nm. El sistema del almacenador intermediario es generalmente un TFA que contiene solvente, pH 2,0. El almacenador intermediario A contiene 0,1% TFA en H2O, y el almacenador intermediario B contiene el 1% TFA/ACN/pH2.0. Disuelva con el almacenador intermediario A antes de la purificación; si la disolución no es buena, disuelva con el almacenador intermediario B y después diluya con el almacenador intermediario A; para los péptidos altamente hidrofóbicos, a veces una pequeña cantidad de ácido fórmico o de ácido acético necesita ser añadida. El análisis de la CLAR de los productos crudos del péptido, si el péptido no es largo (debajo de 15aa), allí será generalmente un pico principal, y el pico principal es generalmente el producto integral; para los péptidos largos sobre 20aa, si no hay pico principal, la CLAR necesita ser utilizada con la masa para determinar el peso molecular, y después para determinar qué pico es el péptido que se sintetizará.
Q
¿Cómo deben los extremos del péptido ser manejados? ¿Guárdelo libremente o bloquéelo?
Los péptidos se utilizan para simular las proteínas. Para imitar el funcionamiento de proteínas, necesitamos sintetizar los polipéptidos con las estructuras similares y las cargas a las proteínas. Cuando un péptido “se corta” de una proteína, el número de cargas en ambos extremos será diferente del de la proteína del cuerpo del gen. Necesitamos cambiar la estrategia compositing para hacerlos constantes. En general: Si la secuencia es del C-término de la proteína, proteja el N-término por la acetilación; si es una secuencia del N-término de la proteína, proteja el C-término por el amidation; si es de la parte media de la proteína, la acetilación y el amidation del uso para proteger los ambos extremos se protegen.
Q
¿Cuáles son las ventajas de péptidos Clavija-modificados?
La modificación del glicol de polietileno es añadir el polímero de molecularidad elevada (glicol de etileno) a la molécula de la blanco con la vinculación covalente. La modificación del glicol de polietileno engaña el sistema inmune de la célula huesped camuflando el polipéptido, aumenta el efecto terapéutico del polipéptido, y aumenta la solubilidad y la biodisponibilidad de drogas hidrofóbicas. Puede también prolongar la circulación de péptidos reduciendo la liquidación renal.
Q
¿Qué debe ser prestado la atención al introducir la modificación fluorescente en los péptidos?
El péptido de KS-V sugiere el añadir de una máquina para hacer chorizos entre la molécula del polipéptido y la modificación fluorescente, que pueden reducir el impacto de la modificación fluorescente en el plegamiento del polipéptido y del atascamiento al receptor. Sin embargo, si el propósito de la modificación de la fluorescencia es cuantificar la migración de la fluorescencia entre diversas estructuras, no se recomienda para introducir máquina para hacer chorizos.
Q
¿Qué debe ser prestado la atención al diseñar los péptidos fosforilación-modificados?
El péptido de KS-V recomienda que al diseñar modificaciones de la fosforilación, la modificación de la fosforilación no debe exceder 10 aminoácidos del N-término para evitar una disminución de la eficacia de acoplamiento.
Q
¿Puede usted hacer el D-péptido? ¿Cuántos tipos de D-tipo aminoácidos naturales hay?
Poder. Hay 19 clases de D-tipo aminoácidos naturales. Gly en aminoácidos naturales no tiene ninguna estructura quiral, y el D-tipo estructura de otros aminoácidos naturales se puede seleccionar en el péptido de Keshengjing. Para los detalles, abra una sesión por favor a la página web oficial para ver la lista de aminoácidos especiales.
Q
¿Cuántos sitios de la fosforilación se pueden incluir en síntesis del péptido de KS-V?
Generalmente, hay a lo más tres, y necesita ser analizado según la secuencia específica.
Q
¿Por qué los polipéptidos experimentan la acetilación del N-terminal y la modificación del amidation del C-terminal?
Tales modificaciones pueden confer en la secuencia del polipéptido las propiedades de la proteína nativa.