Introducción detallada

Para obtener el mejor efecto de producción de anticuerpos, es necesario diseñar cuidadosamente el polipéptido antígeno, y el diseño debe cumplir una condición básica: en el proceso de inmunización,el antígeno no producirá una respuesta inmune excesiva, y al mismo tiempo puede producir generar anticuerpos que se unen a la proteína de interés.

En general, se recomienda que la longitud de la secuencia del polipéptido antigénico esté entre 8 y 20 residuos de aminoácidos.existe el riesgo de que la especificidad del polipéptido no sea fuerte y la capacidad de unión entre el anticuerpo generado y la proteína nativa no sea lo suficientemente fuerteSin embargo, si la longitud de la secuencia es superior a 20, será posible introducir una estructura secundaria, y el anticuerpo resultante puede perder su especificidad, y cuanto más larga sea la cadena peptídica,Cuanto más difícil es sintetizar, y es difícil obtener productos de alta pureza.El péptido KS-V puede proporcionar de manera eficiente y rápida péptidos de antígeno acabados de alta pureza para ayudar a su investigación y desarrollo.

Aplicaciones

Aunque la mayoría de los fragmentos cortos y lineales de péptidos de proteínas no están estructurados en solución acuosa,se ha demostrado que una serie de péptidos inmunogénicos y antigénicos tienen preferencias conformacionales para formas estructuradasMediante el uso principalmente de espectroscopia de RMN y CD, se ha sido posible detectar y cuantificar poblaciones bastante pequeñas de conformaciones helicoidales, helicoidales y helicoidales nacientes.Se han publicado estudios recientes que indican que la presencia de formas estructuradas está correlacionada con la ubicación de los epítopos de células T y/o células B en las secuencias de péptidosLas estructuras cristalinas de rayos X de complejos entre péptidos y anticuerpos antipéptidos muestran con frecuencia que los péptidos se unen en conformaciones beta-turn,y la presencia de hélice en un complejo péptido-anticuerpo se ha demostrado por espectroscopia de RMN. Studies of peptides free in solution and bound to anti-peptide antibodies in the crystal indicate that the structure of the principal neutralizing determinant of HIV-1 probably includes at least one beta-turn in a highly conserved regionEstos resultados pueden utilizarse potencialmente en el diseño de vacunas a base de péptidos.

Ventajas del uso de antígenos péptidos

En primer lugar, los antígenos peptídicos ofrecen una solución inteligente para la generación de anticuerpos en los casos en que se conoce la secuencia de aminoácidos de la proteína diana, pero la proteína en sí no está disponible,o estructuralmente demasiado complejo para obtenerse como proteína estructuralmente estable e intacta (eEn el caso de los productos de la industria de la energía, el consumo de electricidad es muy elevado, y el consumo de electricidad es muy bajo.El enfoque del inmunógeno peptídico ofrece flexibilidad en la selección y diseño de antígenos para dominios de la proteína diana como una ventaja adicionalLos antígenos péptidos también son muy útiles para generar anticuerpos contra los sitios de unión post-translacionalmente modificados en las proteínas diana.

Otras ventajas son:

• El epitopo está bien definido desde el principio.
• la secuencia de proteínas es todo lo que se necesita
• una posibilidad mucho menor de reactividad cruzada
• el antígeno es totalmente sintético, lo que resulta rentable con tiempos de suministro generalmente muy cortos

Estrategias de diseño de antígenos péptidos

Aunque muchas secuencias de péptidos pueden ser inmunogénicas, no todas son igualmente efectivas en la generación de anticuerpos con reactividad contra la proteína diana.El éxito de la generación de anticuerpos con antígenos peptídicos depende de varios factores que deben tenerse en cuenta en el diseño, incluidos:

la exactitud de la secuencia de aminoácidos de la proteína diana
la estructura 2ary / 3ary prevista de la proteína intacta
la selección de los dominios/regiones de la proteína a imitar por el antígeno peptídico
la necesidad de conjugar antígenos peptídicos a una proteína portadora más grande
la facilidad de síntesis de ciertas secuencias de péptidos
Por lo tanto, las siguientes recomendaciones generales se aplican al diseño de los antígenos péptidos:

Asegurar que se han identificado las especies y la secuencia de proteínas correctas.
Seleccionar el antígeno péptido de una región de la proteína nativa accesible a los disolventes.son regiones expuestas en la superficie de la proteína que están en contacto con el medio acuoso (hidrófilo) del disolvente.Algunas áreas de la proteína pueden ser inaccesibles para los anticuerpos, como las regiones transmembrana o el centro de una proteína globular.

Una ventaja importante es que los antígenos péptidos pueden diseñarse para cubrir un epítopo específico de interés.Ciertos dominios también pueden estar presentes en otras proteínas: estas secuencias deben evitarse para minimizar la probabilidad de reactividad cruzada no deseada y así optimizar la especificidad general de los anticuerpos.Se seleccionan mejor las secuencias con una homología de secuencia mínima para reducir la unión no deseada a las proteínas fuera del objetivo..

Dependiendo de la estructura 3D del dominio objetivo en la proteína intacta, pueden requerirse técnicas de restricción para imitar de manera óptima la estructura terciaria del antígeno.Como uno de los especialistas en la imitación de la superficie de las proteínas, KS-V dispone de varias tecnologías (en parte patentadas) para el diseño y síntesis de antígenos peptídicos conformacionalmente restringidos.

Los genes son a menudo demasiado pequeños para generar una respuesta inmune significativa sin una conjugación previa a una proteína portadora como KLH, BSA u OVA.Por lo tanto, por lo general se recomienda el uso de conjugados de proteínas portadoras de péptido .

Síntesis de antígenos péptidos

Para el diseño de los antígenos peptídicos también debe tenerse en cuenta la facilidad de síntesis de secuencias peptídicas específicas.y es favorable que el péptido incorpore aminoácidos que promuevan la inmunogenicidad (como los aminoácidos básicos y aromáticos)El contenido de aminoácidos hidrofóbicos debe mantenerse mejor por debajo del 50%, y también se deben evitar las largas cadenas de residuos hidrofóbicos.al menos un residuo cargado (arginina), glutamina, ácido aspártico o lisina) debe incorporarse en cada cinco aminoácidos.La solubilidad del péptido también puede mejorarse mediante sustituciones conservadoras o adición de residuos polares al extremo N o C.En el diseño de los antígenos, es preferible evitar las regiones complejas, como las hojas beta o las hélices alfa, pero en su lugar buscar regiones flexibles.

KS-V aplica sus capacidades y conocimientos especializados de última generación para la síntesis de antígenos péptidosos, incluidas (si es necesario) restricciones conformacionales, PTM-s, conjugación o biotinilación.Para la mayoría de los proyectos de generación de anticuerpos se recomienda una pureza de al menos el 85% para cualquier antígeno peptídico.Sin embargo, si se desea podemos proporcionar antígenos con mayor pureza también. generalmente vamos a sintetizar aproximadamente 10 mg de péptido, que es generalmente suficiente para la proteína-conjugación,El análisis de detección ELISA y la construcción de una configuración de cromatografía por matriz de afinidad si se desea..