Descripción:

Mediante el mapeo de péptidos, se pueden identificar cambios sutiles en la estructura primaria de una proteína o anticuerpo que pueden afectar la actividad de la proteína o la afinidad de unión.El mapeo de péptidos por LC-MS/MS es uno de los ensayos cualitativos más potentes para confirmar la secuencia primaria de proteínas o anticuerposEste servicio puede utilizarse para comparar diferentes lotes de las mismas proteínas, anticuerpos o biosimilares.

Servicio de análisis de mapeo de péptidos por LC-MS/MS incluye:

• El anticuerpo/proteína de interés se desnaturaliza, reduce y digiere con una enzima proteolítica como LysC o tripsina.
• Opcional: se utiliza una segunda enzima proteolítica para aumentar la cobertura de la secuencia de la proteína.
• Las mezclas de péptidos resultantes se separan en un HPLC de fase inversa. El cromatógrafo de absorbancia UV se genera a UV 214 nm.
• Después de la separación por HPLC, se realiza un análisis adicional mediante una espectrometría de masas de alta resolución (Thermo Fisher Orbitrap Velos o Fusion).
• Se genera un mapa peptídico de la proteína para su comparación con una proteína de referencia.
• Los picos se analizan en la secuencia primaria.
• Opcional (dos muestras o más): se realiza una evaluación de comparabilidad para evaluar la variación de lote a lote entre proteínas o para comparar biosimilares.

Información que debe entregarse:

• Confirmación de las secuencias primarias (cobertura de la secuencia: 60-90% utilizando una enzima; > 98% utilizando dos o más enzimas).
• Glicoprofilamiento de oligosacáridos ligados al N (heterogeneidad de las glicóformas y aproximación de la ocupación del sitio).
• Identificación y cuantificación aproximada de los PTM como la desamidación, la oxidación,Formación de piroglutamato en el término N y procesamiento de Lys en el término C (se pueden detectar posiciones modificadas de aminoácidos y una modificación en %).
• Evaluación de la similitud entre los diferentes lotes.
• Evaluación de la comparabilidad de los biosimilares.

Tratamiento de la muestra: desnaturalización, reducción/alquilación y digestión enzimática seguida de LC-MS o LC-MS/MS.